大肠杆菌Proteinase In天然抑制剂的研究
在大肠杆菌抽抽提物中,我们测到了Proteinase In的天然抑制剂活力,它只能抑制类胰蛋白酶活力,而不影响其寡肽酶活力.采用DEAE纤维素层析、硫酸铵分级沉淀、羟基磷灰石层析、超滤浓缩、S琼脂糖凝胶层析和快速蛋白纯化系统-MnonQ层析,试图纯化这种天然抑制剂.由于抑制剂活力分散,我们没有得到电泳呈一条带的组分.为了进一步研究PrlC类胰蛋白酶活力的天然抑制剂,我们用PCR的方法获得了大肠杆菌....
作者：金志成专业：生物化学分类号：Q556.9导师：朱德煦单位：南京大学
将α乳清蛋白改造成具有生物活性的溶菌酶的蛋白质工程
以α乳清蛋白和溶菌酶的三维空间结构和溶菌酶的催化机制为基础,通过分子设计,将牛α乳清蛋白的基因进行六点突变,突变体α6t在大肠杆菌BL21(DE3)/pLys中进行高效表达.通过包涵体的变复性、蛋白质纯化,得到了具有溶菌酶活性的突变体.经改造过的α乳清蛋白突变体的酶活性为鸡溶菌酶的1/17.5,已经初步具备了水解三糖环底物糖苷键的生物活性.为了进一步研究α乳清蛋白突变体中的各个突变点对活性的重要性....
作者：薛宇鸣专业：生物化学分类号：O78导师：朱德煦;马忠单位：南京大学
构建具有溶菌酶活性的α-乳清蛋白变体的蛋白质工程
α-乳清蛋白和溶菌酶是生物体内功能差异很大的两种蛋白,但是通过基因序列、氨基酸序列以及三维结构上的比较,发现他们存在很大的同源性,很可能都是从古代溶菌酶进化而来.该论文在溶菌酶催化机理和α-乳清蛋白和溶菌酶同源比较的基础上,构建了含三个突变点的α-乳清蛋白变体(H32L,T33E,Y103A),并将其克隆到具有T<,7>启动子的表达载体pET 28a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效....
作者：吴春雷专业：生物化学分类号：Q51导师：朱德煦;马忠单位：南京大学
中国东亚钳蝎抗神经兴奋肽基因克隆、表达、纯化及部分生化性质
从中东亚钳蝎cDNA库筛选得到三种其氨基酸序列并不完全与蝎抗癫痫活性肽一致的蝎抗神经兴奋肽(ANEP)基因,利用pET32a、PNJUTRX-1表达质粒,可使ANEPⅠ、ANEPⅡ、ANEPⅢ基因分别在大肠杆菌中得到可溶性表达,ANEPⅠ、相应修饰C端的ANEPⅡ和修饰其N端的ANEPⅢ多肽,在硫代氨基脲、戊四唑、印防己毒素分别致试验动物神经兴奋模型中,具有较好的抗神经兴奋作用,在细胞离子通道试验中,具有增加胞内Ca<'2+>、Ba<'2+>浓度的生物活性.
作者：张景海专业：生物化学分类号：Q75导师：华子春;朱德煦单位：南京大学
血红素蛋白质的蛋白膜伏安法研究及其在生物传感器中的应用
蛋白膜伏安法是一种研究蛋白质结构与功能关系的新方法.该论文应用蛋白膜伏安法开展了以下几个方面的工作:(1)蛋白质在膜相的功能转换是当前一个研究热点.研究人员应用蛋白膜伏安法对血红蛋白在SP葡聚糖凝胶和蒙脱土膜内的性质进行了研究.(2)应用血红蛋白-DNA膜修饰电极对血红蛋白与一种信号分子--一氧化氮的相互作用进行研究,对循环伏安图中的各个峰分别作了归属,并对其机理作了解释.(3)应用"溶剂工程"方....
作者：樊春海专业：生物化学分类号：O646导师：朱德煦;李根喜单位：南京大学
钯配合物切割蛋白之研究及其在基因工程中的应用
研究人员发现某些Pd(Ⅱ)配合物具有高效和选择性的水解多肽和蛋白质中肽键的功能,并深入研究了配合物与多肽的相互作用和反应机理.该研究的最终目的是设计和合成出高效、专一的人工金属配合物内切酶.该工作通过研究Pd(Ⅱ)配合物cis-[Pd(dtco-3-OH)(H<,2>O)<,2>]<'2+>切割马心细胞色素c和去血红素的细胞色素c这两种空间构象完全不同的蛋白质观察三维结构对水解异性的影响,并首次将Pd(Ⅱ)配合物应用于基因工程产品的切割.
作者：乔锋专业：生物化学与分子生物学分类号：Q51;Q78导师：朱德煦;朱龙根单位：南京大学
人纤溶酶原Kringle 5结构域基因的克隆、表达及其产生的纯化和性质鉴定
根据人纤溶酶原的cDNA序列,用PCR技术获得人纤溶酶原kringle 5结构域的基因,并将其克隆至具有T<,7>启动子的表达质粒pET 25b(+)中.重组载体pET25b(+)/kringle 5与编码Aug U基因的DnaY质粒共转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,在12KD处可见明显的表达条带,表达产物大部分以无活性的包涵体形式存在.包涵体经过体外变复性,SP-Seph....
作者：陈浩专业：生物化学分类号：Q78导师：刘建宁;朱德煦单位：南京大学
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